2025-09-21 00:17:28
熒光定量 PCR 儀的檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到多種因素的影響,包括儀器設(shè)備、試劑質(zhì)量、樣本處理以及實(shí)驗(yàn)操作等方面,。加樣準(zhǔn)確性:在配制反應(yīng)體系和加樣過(guò)程中,移液器的使用不準(zhǔn)確會(huì)導(dǎo)致試劑和樣本的加入量出現(xiàn)偏差。例如,加樣量過(guò)多或過(guò)少都會(huì)影響反應(yīng)體系中各成分的濃度,進(jìn)而影響擴(kuò)增效率和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。反應(yīng)體系配制:反應(yīng)體系中各成分的比例要準(zhǔn)確配制。如果引物、探針、酶、dNTP 等成分的濃度過(guò)高或過(guò)低,都會(huì)影響 PCR 反應(yīng)的特異性和效率,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。此外,反應(yīng)體系中若存在氣泡,可能會(huì)影響熱傳遞和熒光信號(hào)的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)環(huán)境:實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度等條件也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。例如,環(huán)境溫度過(guò)高或過(guò)低可能影響酶的活性和反應(yīng)速率,濕度較大可能導(dǎo)致試劑吸潮變質(zhì),從而影響檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。TET 染料與核酸的結(jié)合具有較高的特異性和穩(wěn)定性,能夠在 PCR 反應(yīng)過(guò)程中準(zhǔn)確地指示目標(biāo)核酸的擴(kuò)增情況;南京96孔熒光定量PCR儀要多少錢(qián)
熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護(hù)和保養(yǎng)可以延長(zhǎng)其使用壽命,保證儀器的性能和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。日常維護(hù)儀器清潔:定期清理儀器表面的灰塵和污漬,使用干凈的軟布擦拭。對(duì)于儀器內(nèi)部,可使用無(wú)絨布或棉簽輕輕擦拭光路系統(tǒng)、反應(yīng)模塊等部件,避免刮傷。注意不要讓液體流入儀器內(nèi)部。檢查儀器狀態(tài):每次使用前檢查儀器的各項(xiàng)參數(shù)是否正常,如熒光檢測(cè)系統(tǒng)、加熱制冷模塊等。查看儀器的指示燈、顯示屏是否正常工作,如有異常及時(shí)記錄并聯(lián)系維修人員。及時(shí)清理樣品殘留:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,及時(shí)清理反應(yīng)板和樣品槽中的殘留樣品,防止樣品干涸后形成頑固污漬,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)??墒褂脺睾偷那鍧崉┎潦?,然后用蒸餾水沖洗干凈,再用干凈的軟布擦干。南京96孔熒光定量PCR儀要多少錢(qián)而熒光定量 PCR 技術(shù)可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)得出結(jié)果,提高了診斷效率。
以下是一些判斷熒光定量 PCR 儀光路系統(tǒng)是否需要校準(zhǔn)的方法:熔解曲線(xiàn)異常峰形改變:熔解曲線(xiàn)的峰形變得不規(guī)則、寬化或出現(xiàn)多個(gè)峰,而樣品和實(shí)驗(yàn)條件均無(wú)變化時(shí),可能是光路系統(tǒng)對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)精度下降,導(dǎo)致熔解曲線(xiàn)的分析結(jié)果不準(zhǔn)確,此時(shí)需要考慮對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。Tm 值偏移:熔解曲線(xiàn)的 Tm 值(解鏈溫度)與預(yù)期值相比出現(xiàn)明顯偏移,且排除了引物設(shè)計(jì)、反應(yīng)條件等因素的影響,可能是光路系統(tǒng)的熒光檢測(cè)存在誤差,影響了對(duì) DNA 雙鏈解鏈過(guò)程的準(zhǔn)確監(jiān)測(cè),需要對(duì)光路進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)。
FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號(hào),而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM(Fluoresceinamidite)即羧基熒光素,具有高量子產(chǎn)率,在被特定波長(zhǎng)的光激發(fā)后會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光,其激發(fā)波長(zhǎng)通常在495nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)在520nm左右。由于其熒光特性穩(wěn)定且靈敏,被廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,作為報(bào)告分子來(lái)對(duì)目標(biāo)DNA或RNA進(jìn)行定量檢測(cè)。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進(jìn)行檢測(cè),例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發(fā)FAM染料發(fā)光的光源以及能檢測(cè)其發(fā)射熒光的光學(xué)系統(tǒng)。以QuantStudio?1Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為例,它配備4種常用的激發(fā)和發(fā)射濾光片,包括FAM、VIC、ROX和Cy5,其激發(fā)光源為白光LED,激發(fā)范圍為455至530nm,可滿(mǎn)足FAM染料的激發(fā)需求。TET 熒光染料本身具有良好的熒光特性,其與核酸結(jié)合后能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光信號(hào)。
熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護(hù)和保養(yǎng)可以延長(zhǎng)其使用壽命,保證儀器的性能和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。定期維護(hù):光路系統(tǒng)校準(zhǔn):根據(jù)儀器的使用頻率和廠(chǎng)家建議,定期對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn),以確保熒光信號(hào)檢測(cè)的準(zhǔn)確性。校準(zhǔn)過(guò)程通常需要使用標(biāo)準(zhǔn)熒光樣品和專(zhuān)業(yè)的校準(zhǔn)工具,由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作。溫度校準(zhǔn):熒光定量 PCR 儀的溫度準(zhǔn)確性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。定期使用標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)或溫度校準(zhǔn)設(shè)備對(duì)反應(yīng)模塊的溫度進(jìn)行校準(zhǔn),確保各個(gè)孔位的溫度均勻性和準(zhǔn)確性符合要求。一般建議每 3 - 6 個(gè)月進(jìn)行一次溫度校準(zhǔn)。更換耗材和部件:根據(jù)儀器的使用情況,定期更換易損耗材,如反應(yīng)板、密封墊、移液器吸頭等。對(duì)于一些關(guān)鍵部件,如熒光檢測(cè)模塊的燈泡、濾光片等,按照廠(chǎng)家規(guī)定的使用壽命進(jìn)行更換,以保證儀器的性能穩(wěn)定。軟件更新:及時(shí)更新儀器的控制軟件和數(shù)據(jù)分析軟件,以獲得更好的性能和功能,同時(shí)修復(fù)可能存在的軟件漏洞。在更新軟件前,要備份好重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),防止數(shù)據(jù)丟失。與核酸結(jié)合特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好的染料,可減少非特異性信號(hào)干擾。南京TET熒光定量PCR儀哪個(gè)好
TET 熒光定量 PCR 儀配備了高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng),包括高性能的激發(fā)光源和高靈敏度的熒光探測(cè)器。南京96孔熒光定量PCR儀要多少錢(qián)
熒光定量 PCR 儀的檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到多種因素的影響,包括儀器設(shè)備、試劑質(zhì)量、樣本處理以及實(shí)驗(yàn)操作等方面,以下是具體介紹:引物和探針:引物和探針的特異性、純度及濃度對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響明顯。若引物特異性不好,可能會(huì)與非目標(biāo)序列結(jié)合,產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增,干擾目標(biāo)基因的定量。探針的質(zhì)量和標(biāo)記效率也會(huì)影響熒光信號(hào)的強(qiáng)度和穩(wěn)定性,進(jìn)而影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。酶的活性:Taq 酶等聚合酶的活性和穩(wěn)定性是保證 PCR 反應(yīng)順利進(jìn)行的關(guān)鍵。酶活性過(guò)低會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率低下,產(chǎn)量不足;而酶的穩(wěn)定性差可能在反應(yīng)過(guò)程中失活,使擴(kuò)增反應(yīng)中斷,影響結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。反應(yīng)緩沖液:反應(yīng)緩沖液的成分和 pH 值等條件對(duì) PCR 反應(yīng)有重要影響。不合適的緩沖液條件可能影響酶的活性、引物與模板的結(jié)合以及 DNA 的穩(wěn)定性,從而導(dǎo)致擴(kuò)增效果不佳,檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。南京96孔熒光定量PCR儀要多少錢(qián)